臨牀基因擴增檢驗技術教學的點滴體會

臨牀基因擴增檢驗技術即我們常説的PCR技術，是分子生物學教學中的一項重要內容，也是臨牀應用非常廣泛的一項技術。這項課程的學習和學生在臨牀的實習往往是分開進行的。學生在校學習的主要是臨牀基因擴增檢驗技術的核酸基本生物化學知識，PCR反應的基本原理、質量控制，臨牀應用等。當學生進入臨牀基因擴增實驗室實習工作後，他們會感覺到在學校學過的和實際看到的有很大區別，這是由於教學的側重點不同造成學生對臨牀基因擴增檢驗技術的認識不足，操作不夠嚴謹、規範。作為一名在臨牀PCR實驗室工作的技術人員，我們的體會是臨牀基因擴增檢驗技術的教學要緊密結合臨牀，通過對臨牀基因擴增實驗室各個環節地介紹實現對基本理論知識地講解，這樣更有利於學生融會貫通。

1、臨牀基因擴增實驗室開展PCR技術必須具備的基本條件

教育學生對臨牀基因擴增實驗室有一個總體的認識，對學生實行規範、嚴格的入室教育,是順利完成教學實習任務的前提和保證[1]。使他們明確臨牀基因擴增實驗室開展PCR技術必須具備的基本條件，即規範的PCR實驗室（經衞生部臨檢中心驗收合格）；編寫適合本實驗室的質量手冊；具備經PCR專業知識培訓的技術人員；使用有生產批文的PCR試劑。通過對規範的PCR實驗室的介紹，使學生了解PCR實驗室是要經過國家驗收的，實驗室的設計、安排都是有嚴格要求的。

2、通過講解PCR實驗室的操作流程，加深他們對實驗室的認識。

PCR實驗室有嚴格的操作流程，進入各工作區域必須嚴格按照單一流向進行，即準備區→標本製備區→產物分析區，我們在教學過程中一定要重點強調這一流程，在學生頭腦中強化這一概念。

3、通過講解PCR實驗室的操作規程，提高學生的生物安全意識。

PCR實驗室有嚴格的操作規程，我們某些實驗室人員由於怕麻煩，自己本身就不嚴格按照PCR實驗室的操作規程去做，比如進入實驗室不換大衣，不換拖鞋，不帶口罩、帽子，隨意亂扔污染性廢物等。在教學過程中，應對看似小的細節進行強調，加強學生的認識。作為帶教老師，我們一定要嚴格要求自己，給學生作出榜樣，同時要嚴格要求學生做到，使他們有一個嚴謹的工作態度，養成良好的工作習慣，提高他們的生物安全意識。

4、通過講解加入內標來避免假陰性結果的出現，幫助學生理解假陰性結果產生的原因及解決辦法。

臨牀標本在核酸提取的過程中，核酸可能丟失，可能殘留PCR擴增抑制物，擴增儀孔間温度存在差異，這些原因均可導致擴增出現假陰性結果。要使學生知道，在臨牀標本進行核酸提取時，加入競爭性或非競爭性內標，可有效地避免假陰性結果的出現[2]。

5、通過講解HBV DNA和HCV RNA實時熒光PCR檢測試劑盒，使學生了解國產與進口試劑相比存在的主要問題

國產HBV DNA和HCV RNA實時熒光PCR檢測試劑盒與進口試劑相比存在的主要問題主要表現在三個方面：①靈敏度低，檢測結果穩定性差。②過度追求操作的簡便化，如對標本未進行核酸純化，加樣量和擴增反應體積過小，沒有內標。③不同批次間的試劑穩定性差。

6、通過講解HBV DNA和HCV RNA檢測量值溯源，加強學生對臨牀PCR實驗室的質量控制的認識。

乙肝病毒和丙肝病毒核酸檢測沒有參考方法，只能通過標準物質來溯源[3]。第一代HBV DNA和HCV RNA檢測用國際標準分別於2000年和1997年建立，目前已分別進入第二代和第三代。我國也已經研製了HBV DNA和HCV RNA檢測的一級和二級國家標準物質。

以上是我們在臨牀基因擴增檢驗技術帶教過程中的一些體會，希望教師在今後的教學過程中，能夠從臨牀實際出發兼顧講授基本理論知識，使學生對臨牀基因擴增檢驗技術有更全面的認識，使他們在日後的臨牀工作中游刃有餘。